制备

细胞要在液氮中冷冻，所以要确保你的罐中充满氮气并且你有空间。细胞应该是健康的（> 90％生存力）并且在对数期生长。您还需要无菌1 mL低温小瓶; 它们有螺旋盖和橡胶密封，以防止氮气流出。

冻存 

1. 在血细胞计数器中计数细胞。在离心机中在“2”上离心10mL细胞10分钟，并重悬于细胞冻存液，冻存液一般为：

   1.培养基：血清：DMSO=7：2：1
   2.血清：DMSO=9：1
   普通细胞系可以用第一种配方冻存，比较娇贵的细胞系用第二种配方冻存，如果实验室条件允许的话，可以都用第二种方法

2. 有些细胞不适合用通用冻存方式，详细请参考  细胞冻存液配方，或者在哈哈体育官网直接搜索细胞，下方会有详细培养注意事项。

   浓度为2×10e6细胞/0.5mL冷冻培养基。在低温小瓶中等分0.5 mL /小瓶。

3. 将小瓶直立放入发泡胶盒中并盖好。置于-70°C下24小时。

4. 将小瓶放入棒中并放入液氮容器中。

复苏

制备

1. 温水浴至37°C。

2. 将10 mL培养基（RPMI，DMEM）置于无菌的15 mL离心管中。将2 mL FBS层缓慢地涂在管底部，这样就可以看到两层。

3. 为您的新文化打造成长媒介。对于单克隆抗体，这将是含有20％FBS和青霉素 - 链霉素的DMEM。

解冻

1. 将细胞从氮气储存中取出，并在37°C水浴中旋转快速解冻。

2. 用70％乙醇对小瓶外部进行消毒，带入培养罩并缓慢加入到您准备的分层培养基的顶部。细胞应落到培养基和FBS之间的界面。

3. 在“3”上离心10分钟。在临床离心机中。

4. 吸取上清液并重新悬浮在您之前制备的生长培养基中。吸取到的CO一个T25和地点2 孵化器为您的新的文化发展。