货号

H180

种属

人

细胞来源

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

轻度贴壁 上皮样

培养条件

培养基：RPMI-1640 +10% FBS+2mM Glutamax+1mM 丙酮酸钠+1%双抗

培养瓶：cellbind细胞培养瓶（corning,3289）

温度：37℃     气相：95%空气，5%二氧化碳

传代

1.该细胞贴壁程度很轻，到货后大部分细胞悬浮，培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱，在通常培养单层细胞的条件下培养24到48小时。细胞贴壁后再更换新培养基。如有需要，也可以收集培养瓶中的培养基和细胞，在300g下离心15min，弃去上清，加入7-10ml培养基重悬细胞，再放到新培养瓶培养。根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，该细胞生长缓慢，并会使培养基迅速变酸，一般2到3天换一次液；

2.待细胞长满瓶底面积70%-80%，需要对其进行传代，传代比例为1:2到1:4；每次传代后48h内不要让细胞受到干扰以免影响细胞贴壁。

3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，并反复吹打使细胞团分散，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

保存

冻存条件：90%FBS+10%DMSO

(备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)

保存条件：液氮存储

供应限制

经供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以哈哈体育会及时安排帮老师解决。

2.运输用的培养基不能用于后续的细胞培养。第一次传代建议传代比例为1:2。

3.细胞漂浮：该细胞贴壁程度很轻，到货后大部分细胞悬浮，培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱，在通常培养单层细胞的条件下培养24到48小时。细胞贴壁后再更换新培养基。如有需要，也可以收集培养瓶中的培养基和细胞，在300g下离心15min，弃去上清，加入7-10ml培养基重悬细胞，再放到新培养瓶培养。